實驗室高效液相色譜測定雞蛋中的三聚氰胺
發布時間：2019-03-26 17:22:27
用三氯乙酸溶液提取雞蛋和雞蛋粉中三聚氰胺的同時,也去除了蛋白質的干擾,樣液經MCX固相萃取柱分離、高效液相色譜分離和質譜進行檢測。在2～200μg/kg范圍內線性關系良好,r=0.9999。檢出限（LOD）為2μg/kg,定量限（LOQ）為10μg/kg。在10～100μg/kg的添加水平范圍內的平均回收率為81.8%～94.9%,相對標準偏差為0.93%～4.77%。方法有良好的精密度和重現性,適用于雞蛋和雞蛋粉中低含量的三聚氰胺檢測。
一，實驗原理 試樣中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，提取液離心后經混合型陽離子交換固相萃取柱凈化，洗脫物吹干后用流動相溶解，用高效液相色譜儀進行測定。
二，實驗試劑和儀器
1、試劑 ①甲醇：色譜純。 ②乙腈：色譜純。 ③氨水：濃度25％～28％。 ④混合型陽離子交換固相萃取柱：60mg，3mL。 ⑤三氯乙酸溶液(10g/L)：稱取10g三氯乙酸，加水至1000mL。 ⑥氨化甲醇溶液：準確量取5mL氨水和95mL甲醇，混勻后備用。 ⑦乙酸鉛溶液(22g/L)：取22g乙酸鉛，用約300mL水溶解后定容至lL。 ⑧濾膜：0.45μm，有機相。 ⑨甲醇水溶液：50mL甲醇加入50mL水，混勻。 ⑩離子對試劑緩沖液：稱取2.02g庚烷磺酸鈉和2.10g檸檬酸于1L容量瓶中，加水溶解稀釋至刻度。 三聚氰胺標準品：純度＞99％。
A．三聚氰胺標準儲備液：稱取lOOmg(精確到0.1 mg)的三聚氰胺標準品，用甲醇水溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，該溶液濃度為lmg/mL，于4℃避光保存，有效期3個月。
B．三聚氰胺標準中間液：吸取標準儲備液5.OOmL，于50mL容量瓶內，用甲醇水溶液定容至，50mL，該溶液i聚氰胺濃度為lOOμg/L，于4℃避光保存，有效期1個月。
C．三聚氰胺標準工作液：用流動相將三聚氰胺標準中間液逐級稀釋得到濃度為1．0μg/mL，5.0μL/mL，10μg/mL，25μg/mL，50μg/mL的標準工作液。
2、儀器 ①高效液相色譜儀，配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。 ②離心機：轉速不低于4000r/min。 ③渦旋混合器。 ④超聲波清洗器。 ⑤氮氣吹干儀。 ⑥同相萃取裝置。
三，實驗步驟
1、提取 稱取2.00g試樣置于50mL具塞離心管中，準確加入20mL三氯乙酸溶液(10g/L)，加入 2mL乙酸鉛溶液(22g/L)，搖勻，超聲提取20min。靜置2min，以不低于4000r/min離心10min，上層液待凈化。
2、凈化 分別用3mL甲醇，3mL水活化混合型陽離子交換固相萃取柱，準確移取10mL離心液分次上柱，控制過柱速度在1mL/min以內。依次用3mL水和3mL甲醇洗滌，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脫。洗脫液500C下氮氣吹干，殘留物用1mL流動相定容，渦旋混合1min，過微孔濾膜后，供HPLC測定。同時做空白實驗。
3、高效液相色譜條件 ①色譜柱：C8柱，柱長150mm，內徑4.6mm，粒度5μm；或性能相當的色譜柱。 ②柱溫：室溫。 ③流動相：離子對試劑緩沖液-乙腈(90:10)，混勻。 ④流速：1.0mL/min。 ⑤檢測波長：240nm。 ⑥進樣量：20μL。
四、結果處理 ：X——試樣中l一聚氰胺的含量，mg／kg； A——樣液中三聚氰胺的峰面積，積分單位； c——標準溶液中j聚氰胺的質量濃度，μg/mL； V——樣液最終定容體積，mL； As——標準溶液中三聚氰胺的峰面積，積分單位； m——試樣的質量，g； f——稀釋倍數。
五、注意事項
1、本方法的定量限為2mg/g。
2、回收率：在添加濃度2mg/kg～lOmg/kg濃度范圍內，回收率在80％～110％之間，相對標準偏差小于10％。
3、精密度：在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值 的10％。
